Cytizīns (pazīstams arī kā baptotoksīns) ir svarīgs alkaloīds, kas iegūts no pākšaugiem, piemēram, *Sophora alopecuroides* un *Thermopsis lanceolata*. To plaši izmanto tādās jomās kā farmācija, augu aizsardzība un bioloģiskie aģenti; produkta tīrība tieši nosaka tā lietošanas efektivitāti un atbilstību normatīvajiem aktiem. Pašlaik citizīna tīrības testēšanas nozares metodes tiek iedalītas trīs veidos, pamatojoties uz precizitāti, izmaksām un pielietojuma scenāriju: ātra kvalitatīva pārbaude, ikdienas kvantitatīvā pārbaude un augstas-precizitātes kvantitatīvā noteikšana. Dažādām paraugu formām ir piemērotas dažādas metodes, piemēram, neapstrādātiem ekstraktiem, rūpnieciskiem gataviem produktiem un atsauces standartiem. Tālāk ir aprakstītas izplatītākās nozares testēšanas procedūras un galvenie punkti.
I. Plānā{1}}slāņu hromatogrāfija (TLC): ātra kvalitatīva skrīnings, piemērots neapstrādātu produktu iepriekšējai pārbaudei.
TLC ir visbiežāk izmantotā ātrās skrīninga metode citizīna ražošanas un ekstrakcijas laikā. Tas ir vienkārši lietojams un ekonomiski izdevīgs, un tas galvenokārt kalpo, lai noteiktu citizīna klātbūtni un veiktu sākotnējo piemaisījumu novērtējumu. Tas ir piemērots sākotnējai izejvielu ekstraktu un neapstrādātu produktu tīrības pārbaudei, bet nevar sasniegt precīzu kvantitatīvo noteikšanu.
Pamatdarbības procedūra: Vispirms sagatavojiet sārmaina silikagela TLC plāksni, sajaucot silikagelu G ar nātrija hidroksīda šķīdumu pastā; vienmērīgi izklājiet, aktivizējiet 105 grādos uz vienu stundu un ļaujiet atdzist lietošanai. Pēc tam izšķīdina testējamo paraugu un citizīna standartstandartu metanolā, lai sagatavotu testa šķīdumus un standartšķīdumus atbilstošās koncentrācijās, un pēc tam uzklāj tos uz TLC plāksnes. Izmantojiet benzola-acetona-etilacetāta-metanola (4:2:1:1) šķīdinātāju sistēmu kā attīstīšanas līdzekli un ļaujiet šķīdinātāja frontei pacelties līdz iepriekš iestatītam augstumam. Visbeidzot noņemiet plāksni, ļaujiet tai nožūt un vizualizācijai izsmidziniet ar modificētu Dragendorfa reaģentu (kālija bismuta jodīdu).
Rezultāta interpretācija: Pēc vizualizācijas novērojiet plankumu stāvokli un skaidrību. Saderīgs paraugs parāda plankumu ar vienmērīgu krāsu un bez būtiskiem svešiem plankumiem, un Rf vērtība atbilst atsauces standarta vērtībai (nozares -standarta Rf vērtība ir aptuveni 0,23). Ārēju plankumu parādīšanās, astes vai ievērojamas Rf vērtības novirzes norāda uz augstu piemaisījumu saturu un neatbilstību tīrības standartiem. Šai metodei ir būtiski ierobežojumi: tā piedāvā tikai kvalitatīvu vai daļēji{5}kvantitatīvu analīzi, nevar precīzi noteikt konkrētas tīrības vērtības, un paraugiem ar augstu piemaisījumu līmeni tiek iegūti ļoti neprecīzi rezultāti.
II. Augstas-efektivitātes šķidruma hromatogrāfija (HPLC): nozares-standarta kvantitatīvā metode, kas piemērota rūpnieciskiem galaproduktiem
HPLC pašlaik ir standarta metode rūpnieciskās -klases un komerciālās izejvielas citizīna tīrības pārbaudei. Tas piedāvā augstu precizitāti un reproducējamību, ļaujot precīzi noteikt konkrētas tīrības vērtības. Tas ir piemērots rafinētiem produktiem, kuru tīrība pārsniedz 90%, un kalpo kā galvenā korporatīvās kvalitātes kontroles un trešās puses tirgus pārbaudes metode.
Standarta nozares hromatogrāfijas apstākļi: tiek izmantota C18 kolonna (250 mm × 4,6 mm, 5 μm). Mobilā fāze sastāv no sistēmas, kas satur 0,05 mol/L nātrija dihidrogēnfosfāta šķīdumu, metanolu un amonija perhlorātu (15 ml: 85 ml: 0,5 g). Darbības parametri ietver nemainīgu plūsmas ātrumu 1,0 ml/min, noteikšanas viļņa garumu 305 nm, kolonnas temperatūru 25 grādi un injekcijas tilpumu 10 μL. Šādos apstākļos citizīna maksimums ir simetrisks ar labu izšķirtspēju, efektīvi atdalot parastos alkaloīdu piemaisījumus.
Praktiskā testēšanas procedūra: pirmkārt, paraugu pirmapstrādes-cietie paraugi jāžāvē 105 grādu temperatūrā 4 stundas līdz nemainīgam svaram, lai novērstu mitruma traucējumus; pēc precīzas svēršanas paraugu ar ultraskaņu izšķīdina metanolā, uzpilda līdz tilpumam un filtrē caur 0,45 μm organisko membrānu. Otrkārt, tiek sagatavoti un injicēti standarta līknes sagatavošana-citizīna standartšķīdumi dažādās koncentrācijās; ir uzzīmēta standarta līkne ar pīķa laukumu uz y-ass un koncentrāciju uz x-ass, kas parāda labu linearitāti diapazonā no 0,04 līdz 1,2 mg/ml. Treškārt, parauga analīze{11}}tiek injicēts testa šķīdums, reģistrēts pīķa laukums un, izmantojot standarta līkni, tiek aprēķināts citizīna saturs, lai noteiktu galaprodukta tīrību.
Šī metode efektīvi novērš traucējumus, ko rada parastie piemaisījumi, un dod rezultātus ar minimālu kļūdu, kas atbilst visām rūpnieciskās ražošanas, kvalitātes kontroles un partijas paraugu ņemšanas prasībām; tas kalpo par pamatu citizīna gatavo produktu tīrības testēšanai (tīrība ir lielāka vai vienāda ar 98%) visā nozarē.
III. Šķidruma hromatogrāfija-Tandēma masas spektrometrija (LC-MS/MS): precīza pēdu analīze, kas piemērota sarežģītām matricām
LC-MS/MS ir augstas-precizitātes noteikšanas metode, ko galvenokārt izmanto, lai noteiktu citizīna tīrību un saturu sarežģītos paraugos, piemēram, augu izejvielās, bioloģiskajos preparātos un pārtikas matricās. Tā piedāvā atdalīšanas un noteikšanas iespējas, kas ir daudz labākas par standarta HPLC paraugiem, kas satur sarežģītus piemaisījumus vai nelielus analizējamās vielas daudzumus. To bieži izmanto zinātniskajā izpētē, augstas kvalitātes produktu vērtības piešķiršanā- un autentiskuma pārbaudē.
Galvenā darbplūsma ietver parauga ekstrakciju, izmantojot paskābinātu acetonitrilu, kam seko attīrīšana, izmantojot cietās -fāzes ekstrakcijas (SPE) kolonnas, lai noņemtu traucējošās vielas, piemēram, pigmentus, polisaharīdus un saistītos alkaloīdus. Noteikšana tiek veikta, izmantojot Multiple Reaction Monitoring (MRM) režīmu, kas ļauj precīzi atšķirt citizīnu un strukturāli līdzīgus saistītos piemaisījumus. Ar ārkārtīgi zemu noteikšanas robežu tas precīzi mēra paraugu tīrību ar zemu citizīna saturu, efektīvi pārvarot jutīgumu pret piemaisījumu traucējumiem, kas saistīti ar UV spektrofotometrijas un titrēšanas metodēm. Tomēr augsto aprīkojuma izmaksu un sarežģītās testēšanas darbplūsmas dēļ šī metode nav piemērota kārtējai partijas testēšanai rūpnīcas iestatījumos.
IV. Diferenciālā skenējošā kalorimetrija (DSC): tīrības noteikšana atsauces materiāliem un augstas{1}}tīrības produktu pārbaude
DSC ir galvenā metode tīrības vērtību piešķiršanai nacionālajiem sertificētajiem etalonmateriāliem un augstiem -tīrības atsauces standartiem (vairāk nekā 99,5%) citizīnam. Tas nosaka tīrību, pamatojoties uz termisko īpašību atšķirībām, un tiek plaši izmantots, lai pārbaudītu augstas-references standartu tīrību un pētītu-augstas-tīrības pakāpes citizīnu, kas ir viena no precīzākajām noteikšanas metodēm nozarē.
Šai metodei nav nepieciešama sarežģīta parauga pirmapstrāde; tas precīzi aprēķina piemaisījumu saturu un tīrību, pārraugot siltuma plūsmas izmaiņas parauga kušanas procesā un salīdzinot rezultātus ar atsauces standarta termogrammu, nodrošinot izcilu stabilitāti un precizitāti. Saskaņā ar nacionālajiem standartiem attiecībā uz sertificētiem standartmateriāliem, pirms var izdot atbilstošus tīrības parametrus, citizīna standartmateriāliem ir jāpiešķir tīrības vērtība, izmantojot HPLC un DSC metožu kombināciju.
V. Tradicionālās noteikšanas palīgmetodes (pamazām tiek atcelta; tikai atsaucei)
UV absorbcija un skābju{0}}bāzes titrēšana pagātnē tika plaši izmantota, lai noteiktu citizīna tīrību; pašlaik tos izmanto tikai ātrai tīrības noteikšanai zemas kvalitātes neapstrādātiem produktiem. UV spektrofotometrija nosaka saturu, pamatojoties uz absorbciju pie noteiktiem viļņu garumiem, savukārt titrēšana kvantitatīvā noteikšanai balstās uz skābes-bāzes neitralizāciju. Lai gan abas metodes ir vienkārši lietojamas un prasa minimālus ieguldījumus iekārtās, tām ir būtiski trūkumi: tās ir ļoti jutīgas pret piemaisījumu, piemēram, citu alkaloīdu, organisko skābju un pigmentu, radītiem traucējumiem, kā rezultātā rodas būtiskas mērījumu kļūdas. Līdz ar to tie ir piemēroti tikai vienkāršiem paraugiem ar augstu tīrības pakāpi un zemu piemaisījumu līmeni; nespējot izpildīt pašreizējos rūpnieciskās kvalitātes kontroles un atbilstības standartus, tos lielākoties ir aizstājusi HPLC.
VI. Galvenie apsvērumi testēšanai (nozares standarta prakse)
1. Paraugu priekšapstrāde: pirms testēšanas visi cietie citizīna paraugi jāžāvē 105 grādu temperatūrā 4 stundas, līdz tiek sasniegts nemainīgs svars, lai noņemtu adsorbēto mitrumu; tas neļauj mitrumam atšķaidīt aktīvo sastāvdaļu un radīt mākslīgi zemu tīrības pakāpi. Standarta atsauces materiāla ampulas ir jāizlieto uzreiz pēc atvēršanas, un tās nevar aiztaisīt atkārtoti lietošanai.
2. Piemaisījumu kontrole: augu-atvasinātie paraugi ir rūpīgi jāattīra, lai noņemtu atlikušos polisaharīdus, flavonoīdus un citus alkaloīdus, tādējādi novēršot piemaisījumu ietekmi uz hromatogrāfijas pīķiem un apdraudot testa rezultātus.
3. Metodes izvēle: TLC izmanto jēlproduktu iepriekšējai skrīningam; HPLC tiek izvēlēts rūpnieciskās gatavās produkcijas kvalitātes kontrolei; LC-MS/MS ir izvēlēts paraugiem ar sarežģītām matricām; un HPLC un DSC kombinācija tiek izmantota augstu -tīrības standartu noteikšanai.
Kopsavilkums
Ir izveidota daudzpakāpju nozares sistēma citizīna tīrības testēšanai. HPLC ir kļuvis par galveno standartu rūpnieciskajā ražošanā un komerciālajā tirdzniecībā tās precizitātes, efektivitātes un izmaksu lietderības dēļ. TLC ir piemērota ātrai sākotnējai pārbaudei, savukārt LC-MS/MS un DSC atbilst augstām-precizitātes testēšanas prasībām attiecībā uz sarežģītiem paraugiem un augstiem{5}}tīrības standartiem. Katrai metodei ir noteikta loma, kopā veidojot visaptverošu risinājumu citizīna tīrības pārbaudei.
Shaanxi Lv Ke Chun Yuan Biotechnology Co., Ltd
Mūsu adrese
Huaxia Yue World, Veibinas rajons, Baoji pilsēta, Šaansji province
Tālruņa numurs
+86-13571783771
E-pasts
